细胞实验 - 实验外包 - 基尔顿生物科技(上海)有限公司
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Products 细胞实验
产品名称: 流式检测
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时间: 2017 - 03 - 29
流式检测大致分为流式细胞术、细胞周期检测、细胞增殖检测、细胞因子检测 第一、流式细胞术(FlowCytometry,FCM):   就是对在高速流动的鞘液包裹下的细胞、粒子进行分析和分选的技术,这种细胞或粒子是经过特异荧光标记的。其特点是测量速度快,每秒钟能测数千个乃至上万个细胞,且可进行多参数测量,另一特点是在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来,这就是分选技术。   重要参数:前向角散射(FSC):前向角散射光的强度与细胞的大小有关,也就是说,同一个细胞群体,FSC强的,其细胞大一些,而FSC弱的,其细胞小一些。侧向角散射(SSC):侧向角散射又称90°散射或大角散射。侧向角散射光对细胞膜、胞质、核膜的折射率更为敏感,对胞内较大的颗粒也会有反应。所以,侧向角散射光的强弱可反应细胞内精细结构和颗粒的性质。荧光信号(FL):是细胞或细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光,不同的荧光染料其发射波长不同。通过荧光强度可将同一个细胞群体中的有荧光标记的细胞与无荧光标记的细胞区分开来,也就是我们通常所说的阳性细胞,也可以将阳性细...
产品名称: 原代细胞分离
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时间: 2017 - 03 - 29
一、细胞培养1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏(可参阅后面有关章节)为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。 二、原代细胞分离凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可...
产品名称: 细胞侵袭实验
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时间: 2017 - 03 - 29
细胞侵袭实验目的:研究趋化因子或其他营养物质对细胞侵袭的影响。实验原理:将细胞种于上室,趋化因子等种于下室,细胞会向营养成分高的下室跑。与迁移实验不同是侵袭实验需要在小室聚碳酸酯膜上铺设一层基质胶。用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。实验材料仪器:超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜实验内容与方法:1. 将细胞种于上室,趋化因子等种于下室2. 培养一定时间后观察计数细胞形态或测定相关理化性质客户提供实验信息:1、实验信息(客户提供):2、实验材料提供(1)样本材料:生长状况良好的宿主细胞株,细胞培养条件(2)试剂:Transwell小室需客户提供或委托我公司代购,如有药物则提供加药浓度结果提交:提交实验报告书(实验试剂与设备、实验过程、结果分析、原始数据、细胞图片等); 目前,基尔顿生物主营实验技术服务,如想了解细胞侵袭的更多内容,你可以通过网页咨询在线客服,或致电我们将热情为您服务!
产品名称: 细胞迁移
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时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍细胞迁移是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一,是机体正常生长发育的生理过程,也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。检测细胞迁移能力的实验包括划痕实验和Transwell实验。 二、实验原理细胞划痕实验是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间是一种简单易行的检测细胞运动的方法,实验成本低,可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。Transwell的基本原理是将transwell小室放入培养板中,小室内称为上室,培养板内称为下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,上室内添加上层培养液,下室内添加下层培养液。将细胞种在上室内,由于膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成...
产品名称: 细胞划痕
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时间: 2017 - 03 - 29
细胞划痕介绍:细胞划痕是一种简单易行的检测细胞运动的方法,实验成本低,可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。 细胞划痕内容:材料:6 孔板(其他的也可以,但感觉6孔比较好,大小适中)、marker笔直尺、20微升枪头(灭菌)、无血清培养基、PBS步骤:所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)1.先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。2.在空中加入约5X105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。3.第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。4.用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。5.放入37度5%co2培养箱,培养。按0,6,12,24小时取样,拍照。 细胞划痕注意事项:一般做划痕实验,都是在无血清或者底血清状态下培养的,否则细胞增殖就不能忽略。按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,这就解决了前后观察时位置不固定的问题。目前,基尔顿生物科技(上海)...
产品名称: 细胞增殖
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时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍细胞增殖是生物体的重要生命特征,细胞以分裂的方式进行增殖。通过细胞分裂,可以将复制的遗传物质,平均地分配到两个子细胞中去。细胞增殖实验包括MTT法和CCK8法。二、服务流程1、细胞培养2、药物处理3、试剂处理4、测定吸光度5、撰写实验报告三、客户提供1、培养好的细胞(大于106)以及所需药品。2、药物作用方式(药物浓度、时间等)。四、交付内容实验报告:详细操作步骤、统计分析。五、服务列表项目周期MTT法5个工作日CCK8法5个工作日
产品名称: 血管生成技术
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时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍肿瘤血管生成是一个极其复杂的过程,一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮细胞增殖、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。由于肿瘤组织这种新生血管结构及功能异常,且血管基质不完善,这种微血管容易发生渗漏,因此肿瘤细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。血管生成(Angiogenesis)是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉新的毛细血管性血管的生长。无论原发性肿瘤还是继发性肿瘤,一旦生长直径超过1~2 mm,都会有血管生成。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。 二、服务流程方案设计预实验细胞处理及相关检测数据分析及出具实验报告 三、客户提供目的细胞及信息,实验分组及方案 四、交付内容实验报告,包括实验流程、仪器方法、原始数据及图片等。周期:2-3个月
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时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍 大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(MMP)的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。 二、实验原理 JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料,可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在,分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1 浓度低或膜电位水平低时,主要以单体形式存在,激发波长为527nm,呈绿色荧光;当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时,形成聚合物,发出红色的荧光,激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时,线粒体跨膜电位被去极化,JC-1从线粒体内释放,红光强度减弱,以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光,根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。 三、实验流程1. 细胞培养;2. 用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性依照组合阳性对照组,收集细胞;3. 用PBS洗涤细胞三次,收集不多于1×106的细胞;4. 取100 μL 10×...
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时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M期,获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。将Annexin V 进行荧光素标记,以标记了的Annexin V作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 二、服务流程1、细胞固定2、配置染色液3、细胞染色4、上机检测5、结果分析三、客户提供培养好的细胞(大于106)。四、交付内容实验报告:详细操作步骤、流式上机图片及统计分析结果。五、服务列表项目说明周期细胞周期流式检测PI染色5个工作日细胞凋亡流式检测Annexin V与PI标记5个工作日
产品名称: 细胞共培养
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时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍细胞共培养是指不同的细胞共同培养。共培养体系主要用于诱导细胞向另一种细胞分化,诱导细胞自身分化,维持细胞功能和活力,对细胞增殖进行调控等。细胞共培养体系包括直接共培养体系和间接共培养体系。直接共培养体系,即将2种或2种以上的细胞同时或分别接种于同一孔中,不同种类的细胞之间直接接触,研究分泌的细胞因子或直接接触等相互作用方式对细胞的影响;间接共培养体系,即将2种或2种以上的细胞分别接种于不同的载体上,然后将这两种载体置于同一培养环境之中,使不同种类的细胞共用同一种培养体系而不直接接触,从而研究细胞分泌和代谢产生的物质对另一种细胞的影响。 二、实验原理Transwell共培养可实现非接触性共培养,主要是运用一种特殊的共培养工具进行细胞共培养研究,探讨两种细胞的相互作用情况。transwell小室放入培养板中,小室内称为上室,培养板内称为下室,上下层有一张有通透性的聚碳酸酯膜,这层膜带有微孔,孔径最大为12.0 μm,最小为0.1 μm,小于3.0 μm孔径条件下,细胞不会迁徙通过,使得培养的两细胞不能相互接触。 三、实验流程直接共培养:1. 制备细胞悬液:消...
产品名称: 细胞实验
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时间: 2017 - 03 - 29
一、细胞培养1取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。2培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。3冻存及复苏(可参阅后面有关章节)为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。 二、原代细胞分离凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。1悬浮细胞的分离方法组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料,最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层,这样可...
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍稳定细胞系是指将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。常用物理方法(电转)、化学方法(脂质体等)、生物方法(病毒)。 二、实验原理外源基因在细胞中的表达可分为两大类,一类是瞬时表达,一类是稳定表达(又叫永久表达)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,虽然可以达到高水平的表达,但通常只持续几天。后者外源DNA整合到宿主细胞染色体上,使宿主细胞可长期表达目的基因。建立稳定细胞株,一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶细胞进行筛选。最常用的抗性标记基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。 三、实验流程1、载体构建(表达质粒载体、病毒载体);2、转染/感染;3、目的蛋白初步检测;4、抗生素筛选;5、目的蛋白再次检测(定性/半定量);6、单克隆细胞株稳定性检测。 四、 客户提供培养好的细胞 五、 公司提供:基本实验步骤、图片、数据...
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