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基尔顿生物科技 JRDUN BIOTECHNOLOGY
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实验服务
产品名称:

扫描电镜

上市日期:2017-03-29

一、服务介绍

 扫描电镜是1965年发明的较现代的细胞生物学研究工具,它具有制样简单、放大倍数可调范围宽、图像的分辨率高、景深大等特点。近年来,扫描电镜已广泛地应用在生物学、医学、等学科的领域中。

 

二、实验原理

 主要是通过发射电子聚焦光束来扫描样品的表面形态.电子束与样品表面的样子发生作用,产生多种能够被检测的信号,这些信号就包含了样品的表面形态和组成.染色。

 

三、实验流程

1. 样品的初步处理

a.取材样品面积可达8mm×8mm,厚度可达5mm。对于易卷曲的样品如血管、胃肠道粘膜等,可固定在滤纸或卡片纸上,以充分暴露待观察的组织表面。

b.样品的清洗

(1)用等渗的生理盐水或缓冲液清洗;

(2)用5%的苏打水清洗;

(3)用超声震荡或酶消化的方法进行处理。

c. 固定

固定所用的试剂和透射电镜样品制备相同,常用戊二醛及锇酸双固定。由于样品体积较大,固定时间应适当延长。也可用快速冷冻固定。

d. 脱水

样品经漂洗后用逐级增高浓度的酒精或丙酮脱水,然后进入中间液,一般用醋酸异戊酯作中间液。

2. 样品的干燥

a.空气干燥法

空气干燥法又称自然干燥法,就是将经过脱水的样品,让其暴露在空气中使脱水剂逐渐挥发干燥。这种方法的最大优点是简便易行和节省时间;它的主要缺点是在干燥过程中,组织会由于脱水剂挥发时表面张力的作用而产生收缩变形。因此,该方法一般只适用于表面较为坚硬的样品。

b. 冷冻干燥法

(1)置于冷冻保护剂中:将样品置于冷冻保护剂中浸泡数小时。常用的冷冻保护剂为10%~20%二甲基亚砜水溶液,或15%~40%甘油水溶液。

(2)骤冷:将经过保护剂处理的样品迅速投入用液氮预冷至(150℃的氟利昂冷冻剂中,使样品中的水分很快冻结。

(3)干燥:将已冻结的样品移到冷冻干燥器内已预冷的样品台上,抽真空,经几小时或数天后,样品即达到干燥。本方法不需要脱水,避免了有机溶剂对样品成分的抽提作用,不会使样品收缩,也是较早使用的方法。但是,由于花费时间长,消耗液氮多,容易产生冰晶损伤,因此未被广泛应用。

3. 样品的导电处理(真空镀膜法)

 真空镀膜法是利用真空膜仪进行的。其原理是在高真空状态下把所要喷镀的金属加热,当加热到熔点以上时,会蒸发成极细小的颗粒喷射到样品上,在样品表面形成一层金属膜,使样品导电。喷镀用的金属材料应选择熔点低、化学性能稳定、在高温下和钨不起作用以及有高的二次电子产生率、膜本身没有结构。现在一般选用金或金和碳。为了获得细的颗粒,有用铂或用金-钯、铂-钯合金的。金属膜的厚度一般为10 nm~20 nm。真空镀膜法所形成的膜,金属颗粒较粗,膜不够均匀,操作较复杂并且费时,目前已经较少使用。4. 拍摄

 

四、客户提供

组织、细胞

 

五、公司提供

基本实验步骤、药品、样品处理、图片及图片分析

实验周期:3-4周

 

 

 

 

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