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Products 整体课题外包服务
产品名称: Label free
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
Label free: 非标定量蛋白质组学技术;比如你有10个组织样品,分别提取蛋白质并酶解成肽段。然后每一个肽段样品进行LC-MS分析,这样就得到10个MS数据;对于1条肽段,其在10个样品中的丰度(量)与其在MS1中的峰面积或信号强度成正比;理论上,对于10个样品中的同一条肽段,其在LC上的保留时间(retention time, RT)是一致的,因此,可以通过对比MS图谱,实现对蛋白质在不同样本中的相对表达水平的定量分析。 Label free技术特色:1、与SILAC, iTRAQ/TMT技术相比,样品无需任何标记,能最终程度地保留样品的“真实性”;2、样品处理步骤简单,蛋白质只需酶解即可进行LC-MS分析;3、能很大程度的节省样本制备费用。 Label free分析软件Maxquant,Progenesis 等
产品名称: iTRAQ
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
背景简介:iTRAQ和TMT的技术原理完全一样,所不同的是二者的分子结构有差异。与SILAC相比(标记蛋白质),iTRAQ和TMT是对肽段进行标记的。依据iTRAQ/TMT标签的质量数差异,通过MS实现对多组样品中的蛋白质进行相对定量:SILAC是通过一级MS( MSl)对蛋白质进行定量,而iTRAQ/TMT是通过二级MS( MS/MS.MS2)进行定量的;iTRAQ/TMT几乎能兼容所有来源的蛋白质样品,并且能同时分析多达8-10组的样品,分析通量高。  试验流程1、分别提取蛋白质并定量;2、Trypsin分别对蛋白进行酶解,提取肽段;3、用不同质量数的iTRAQ/TMT标签分别对肽段样品进行标记:4、标记完成后,混合样品,用SCX进行组分分离(15-20组分);5、对每个组分进行LC-MS分析:6、蛋白质鉴定与定量分析,筛选差异表达的蛋白;7、生物学实验验证(Western blot,EUSA等): 目前,基尔顿生物主营实验技术服务,欢迎广大科研爱好者前来咨询!
产品名称: EMSA实验
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
EMSA:凝胶迁移或电泳迁移率检测是一种检测蛋白质和DNA序列相结合的技术,最初用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用,可用于定性和定量分析。分为2种类型:同位素标记探针,非同位素标记探针。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。 实验步骤:探针的标记,探针的纯化,EMSA胶的配制,EMSA的结合反应,探针冷竞争反应,突变探针冷竞争,super-shi...
产品名称: 2D-DIGE
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
DIGE —双向荧光差异凝胶电泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),是在传统双向电泳的基础上发展而来的新型蛋白质组学定量技术,其分离蛋白质混合的原理与双向电泳是一致的,主要利用蛋白质的等电点和分子量的差异来分离蛋白质混合物,同时应用荧光染料的灵敏度及内标的使用等技术,使其在定量蛋白质组学的研究中效果明显优于传统双向电泳。 DIGE使用的荧光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它们能与蛋白质的赖氨酸侧链氨基反应而使蛋白质被标记,被标记蛋白质的等电点和分子量几乎不受影响,等量混合标记好的蛋白质后进行双向电泳,不同凝胶之间可以通过cy2内标匹配,消除凝胶之间的差异,蛋白质表达量的变化则通过cy3和cy5不同荧光的强度来体现。 二、与常规双向电泳后,银染或考染胶相比,DIGE具有以下优势:  1、灵敏度高,最低可检测到125pg的蛋白质; 2、高效性,同一块凝胶上可以电泳两个样品,减轻了工作量; 3、线性范围更广,动态范围高达10-5; ...
产品名称: microRNA芯片
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
microRNA芯片:RNA干扰(RNA Interference, RNAi)现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制。将含有靶基因mRNA同源互补序列的RNA(Double strand RNA, dsRNA)导入细胞后,能够特异地识别该mRNA,引起mRNA的降解,从而导致相应的功能缺失。RNAi提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,该技术已被广泛用于研究基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤基因治疗领域。目前常用的RNA干扰手段为miRNA、 shRNA和siRNA等。MiRNA是一类可以通过RNAi机制调节基因表达的内源性小RNA,人工miRNA与shRNA的设计原理基本相同,由于miRNA具有内源性,因此其更易产生有效的基因沉默。 技术流程:dsRNA或pre-miRNA被导入细胞后,能够被一种特异的核酸内切酶(Dicer)识别并切割成为小片段,这些片段在RNA解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RNA-Induced Silencing Complex,RISC),...
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
一、实验介绍Luminex xMAP(multi-analyte profiling)技术,又称流式荧光技术、液态芯片。该技术以抗体为基础,以荧光编码微球为核心,整合了激光检测、应用流体学、高速数字信号和计算机运算法则等多项技术,实现了多因子的高通量检测。目前, Luminex xMAP技术已被广泛应用于临床诊断、生物制药、生物医学研究等领域,成为医学诊断技术和疾病机制研究等的重要发展方向。 二、实验原理把直径为5.6 μm的骤苯乙烯小球(或6.5μm的磁珠)用荧光染色的方法进行编码,通过调节荧光染料的不同配比获得多达500种不同特征荧光谱的微球,将每种编码微球共价交联上针对特定检测物的抗原、抗体或核酸探针等捕获分子。微球混合后加入微量待检样本,悬液中的靶分子与微球表面交联的捕获分子特异性结合,在一个反应孔肉同时完成多达500种不同的检测反应。最后用Luminex 200或FLEXMAP 3D进行检测,仪器通过两束激光分别对两只另微球的编码和检测微球上报告分子的荧光强度,从而实现对目的因子的定量分析。 三、样本要求1、单个样品的体积≥100ul,如果同一样本需检测多...
产品名称: 真核基因转染
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。目前,将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类:1、脂质体(或是脂质体替代物)转染;2、电转;3、病毒感染。转染技术又可分为瞬时转染和稳定转染基因的功能研究可分为loss-of-function和gain-of-function,即通过过表达该基因和抑制内源基因的表达的手段来研究某个基因的生物学功能。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。瞬时转染 服务介绍通过脂质体介导转染法基因转染技术,将靶基因导入细胞,一般在转染后48小时左右,靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的,48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能(短时间即可进行观察,但效应会很快丢失) 服务流程1、接收质粒、细胞2、细胞培养3、转染4、拍照5、效率鉴定客户提供:1、构建好的外源基因载体,或由本公司进行载体构建(需提供目的基因名称、种属、序列或Gene Accession Number)。2、待转染的细胞系(1×106个细胞,可传代,倍增时间小于...
产品名称: 生物信息学
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
随着生命科学和计算机科学的飞速发展,生物信息学作为两者相结合的一门新学科,已广泛应用于生命科学的多个领域,成为解决科学问题的一个重要工具。科研工作者们具有专业的背景,然而如何运用生物信息学服务解决科学问题,是大家都面临的问题。丰核信息为广大科研工作者提供专业的生物信息服务,与您一起解决科学问题。 一、服务介绍 近几年,实验数据不断积累并存储在公用数据库中,可供广大科研工作者下载使用。因此,对这些数据进行整理,并进一步深度挖掘,已成为一个重要研究方法。 二、服务流程1、客户提供研究方向2、生信工程师提供分析提纲3、反馈沟通4、进行数据分析5、出具分析报告 三、研究案例展示(芯片分析) 研究背景肝癌可以分为三种类型:肝细胞癌、胆管细胞性肝癌和混合性肝癌。本研究的目的是为了寻找这三种肝癌基因表达情况的不同点和相同点。 研究策略1 从NCBI GEO数据库中下载转录表达谱,包括70张肝细胞癌芯片,13张胆管细胞性肝癌芯片和7张混合性肝癌芯片。2 对三种类型的肝癌进行两两比较,寻找差异基因。3 蛋白互作网络构建,聚类分析,MCODE分析...
产品名称: 全基因组重测序
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍全基因组重测序是对基因组序列已知物种的个体进行基因组测序,并在个体或群体水平进行差异性分析的方法。基于全基因组重测序技术,我们能够快速的进行种子资源普查筛选,寻找到大量基因变异,并实现遗传进化分析及重要性状候选基因预测。而随着测序成本降低和已知基因组序列的物种增多,重测序已成为动植物育种研究中最为迅速有效的方法之一。二、操作流程提取基因组 DNA 并随机打断,电泳回收所需长度的 DNA 片段,并加上接头进行 Cluster制备,最后上机测序。利用双末端( Paired-End) 的方案对插入片段两端进行测序,除获得序列信息外,还有利于大片段结构变异的挖掘。三、指标评价测序深度是评价测序量的最重要指标,测序深度的增加有利于基因组覆盖度的上升,并同时减少测序的错误率。在重测序个体水平采用双末端测序,当测序深度在 10X 以上时,基因组覆盖度和测序错误率控制均得以保证。而在群体方面,3-5X 即可得到保证。
产品名称: 基因芯片
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
基因芯片广泛用于模式物种的DNA、RNA和表观遗传等研究。丰核信息提供SNP芯片、RNA芯片、甲基化芯片分析服务,涵盖人类和主要模式物种。丰核信息拥有自主知识产权的标准芯片分析系统,可以快速分析包括Illumina、Agilent、Affy等公司出品的常规基因芯片。 常见芯片列表项目分类名称描述Illumina SNP芯片Human omni-zhonghua-8 beachip包含90万个位点Agilent表达谱芯片Agilent SurePrint G3 Human Gene Expression 8×60K V2涵盖50,599条转录本信息Agilent SurePrint G3 Mouse Gene Expression 8×60K涵盖55,681条转录本信息Agilent SurePrint G3 Rat Gene Expression 8×60K涵盖30,003条Entrez Gene RNAsAgilent miRNA芯片Agilent Human miRNA Array V19.0覆盖2006个人类相关miRNAAgilent R...
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
一、过表达慢病毒构建及包装特点:1. 直接包装成为假病毒颗粒,对分裂和非分裂细胞均有感染作用,适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞 (比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。2. 可以通过简单方式,在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。3. 可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。4.无需任何转染试剂,操作简便。5.可以根据客户需要制备多种标记。  二、过表达慢病毒构建及包装原理:慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。 三、过表达慢病毒构建及包装流程:1. 含有目的基因的慢病毒表达载体的构建和质粒纯化提取。    注:客户也可以提供构建...
产品名称: 定点突变
型号:
时间: 2017 - 03 - 29
一、服务介绍定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征,是基因研究工作中一种非常有用的手段。通过PCR等方法向目的DNA片段(可以是基因组,也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化),包括碱基的插入、删除、转换和颠换等。二、服务流程1)PCR摸索最佳模板浓度2)DMT酶体外消化PCR产物3)转化DMT感受态细胞4)挑克隆培养三、客户提供1、含待变基因的质粒一份,量不少于1.0 μg。2、待变基因原始序列文件。四、交付内容1、不少于1μg的突变后的质粒一份。2、含上述质粒的菌株一份。3、实验报告:详细步骤、测序结果。五、服务列表项目说明周期基因定点突变,长度   1个突变10个工作日2个突变10个工作日3个突变10个工作日3个以上突变点需根据具体方案而定基因定点突变,长度   1个突变15个工作日2个突变15个工作日3个突变15个工作日3个以上突变点需根据具体方案而定基因定点突变,长度2.5 kb   基因定点突变,长度需根据具体方案而定基因定点突变,长度需根据具体方案而定基因定点突变,长度需根据...
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