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细胞培养的不好,早该这样做了

日期: 2019-08-06
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在还没有开始培养它们之前,你就需要做好这些准备。

包括耗材的处理、试剂的配置,无菌检验等等。

玻璃器皿的清洗,对于玻璃器皿(细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干净(注意死角),然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水冲洗数遍,除去残留酸液。瓶子之类,冲洗过程要使劲摇晃。

试剂配置,细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节。

无菌检验,主要采用过滤除菌:如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌:如 PBS、D-Hank's等。

不同细胞对培养基的要求是不同的,要根据自己的细胞要求使用。

至于实验操作,脑子里时刻提醒自己“无菌”;

实验进行前,超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。

每次操作只处理一株细胞株,避免细胞间交叉污染。

实验完毕后,将实验物品带出工作台,再次以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。实验用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般不要再边缘区域操作。

你最好做到每天都去探望探望它们,看看他们的成长情况

1、检查培养液颜色与透明度的变化,颜色变黄,说明PH值下降;变红或紫红色,说明PH值上升,细胞生长停滞、死亡,一般生长稳定的细胞2-3天换液一次,生长缓慢的细胞可3-4天换液一次。

2、观察细胞生长状态,细胞长满瓶底的80%,应及时传代。

3、观察细胞形态变化,细胞透明度大、折光性强、轮廓清晰为佳。

4、注意微生物污染,常常出现培养液混浊,液体内漂菌丝或细胞菌,不仅仅指微生物,包括所有混入培养环境中的细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物及细胞。


如果你培养的细胞被污染了,无非是下面几个污染途径:

1、空气是微生物传播的最主要途径,操作时尽量避免说话、咳嗽、打喷嚏;

2、使用的培养器械及器皿清洗消毒不彻底;

3、培养两种以上细胞时,操作不规范,可能导致细胞交叉污染;

4、血清有问题,可能血清在生产时就已经被支原体或病毒污染;

5、原代培养的污染多数来源于组织样本。

注意问题:操作全过程要求无菌、胰酶消化时间要适度、吹打细胞时用力要适度,尽量减少气泡。


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