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原代细胞培养实验外包

日期: 2018-12-07
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原代细胞培养是指细胞分离之后至初次传代之前的细胞培养阶段。

原代细胞培养四个阶段:1.获取样品 2.分离组织3.解剖或解离组织块4.接种于培养器皿中培养


原代细胞培养种类:

1. 将组织块贴附于适宜的基质中,细胞可自组织块向外迁移生长。

2. 将组织块用机械法或酶消化法处理后获得细胞悬液,接种细胞悬液,其中部分细胞黏附于基质生长。


酶的种类:胰蛋白酶

          胶原酶

          弹性蛋白酶

          链酶蛋白酶

          裂解酶

          脱氧核糖核酸酶

          透明质酸酶

这些酶即可单独使用,又可联合应用。


原代细胞培养共同需要的条件:

在取材时需去除脂肪和坏死组织;

为减少对组织的损伤,需用锋利的器具;

适度离心以去除用于解离的酶;

由于原代培养组织细胞的存活率很低,原代培养的细胞密度应高于正常传代培养的细胞密度;

营养丰富的培养基如Ham’s F12比简单的培养基(Eagle’s MEM)更可取。如添加血清,胎牛血清比牛或马的血清更好,细胞成活率更高。特殊细胞类型的分离可能需要选择性培养基。

与成体组织相比,原代培养时用胚胎组织更易分离,细胞更易存活,增殖速度更快。


组织分离:对人或动物组织处理之前,请确认你的工作符合医学伦理学规则和现行的动物实验法规。对人体活检或胚胎组织进行研究时获得本地伦理委员会、病人及其亲属的同意。


若取材部位容易被污染(如皮肤)应先用75%乙醇消毒,在无菌条件下切除组织,放在取材用转运培养基中,尽快转移至培养室。若只能延迟转移,可于4 ℃保存,不超过72h,但是转移越快存活率越高。


取材的基本要求:

速度要快,新鲜组织2h内送到实验室;

常温或者4度保存运输,切勿冻存;

严格无菌环境:所用离心管和试剂等均为无菌级,密封良好;

保存方式:液体样本采用无菌离心管(血液用抗凝管);组织样本放入盛有2%双抗的PBS溶液的无菌离心管中,管口用封口膜封紧。


分离组织并进行原代培养,是特殊功能细胞培养的也是一个重要的阶段。

不同种类的细胞原代培养应采用相应的技术方法,选择好的途径,参考以前的相关工作文献。


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