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细胞划痕实验

日期: 2018-11-15
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细胞划痕实验是简单经济研究细胞迁移的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。

一. 实验准备

(1) 直尺和marker笔在操作前在超净台内紫外照射30min。

(2) 胰酶,细胞培养基。

(3) 细胞培养六孔板。

细胞划痕实验

二.实验步骤

1细胞分盘

通过胰酶消化细胞3分钟,加入培养基终止消化反应。然后轻轻吹打混匀细胞,将细胞均匀种于六孔版。将细胞置于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h。细胞数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。

注意:可以先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀划一条横线,大约每隔0.5~1cm一道,可以画穿孔的直径,也可以画井字(可选步骤);手动划痕,不能每次划痕的一致,或者进行划痕时会对边缘的细胞造成机械损伤,因此可以选择使用划痕插件。

细胞划痕实验

2划线

第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜。细胞划痕重要的是线尽量画直,且实验组和对照组细胞宽度相近,实验组和对照组可比性。


3冲洗细胞

用PBS轻轻洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。


4培养、拍照

放入37度5%CO2培养箱,培养。按0, 12,24小时取样,拍照。拍照时“划痕”的方向好在视野内为水平的或者垂直的。

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