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细胞培养常见污染的识别及处理?

日期: 2018-11-07
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1、细菌:

识别:细菌在显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,有球形,链形,杆形等。大家不必深究。只要发现培养液浑浊变黄,培养瓶顶部有一层细沙一样的东西。就知道大事不好啦。见下图。

细胞培养常见污染的识别及处理?

处理:可在培养液中加相应的抗生素处理。可以用四环素,庆大霉素,或者链霉素,前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。其实,毛毛虫说句实话,一旦发生污染,就已经大势已去了。如果细胞不是特别特别珍贵的话,还是趁早扔了,重起炉灶吧。

所以,重要的还是防范于未然。做好培养间,CO2孵箱,器皿和培养液的消毒灭菌工作。在操作的时候,严格执行无菌操作规范。


2、霉菌

识别:因为培养液是清亮的,所以霉菌污染非常难以早期发现,等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,如同风中柳絮。细胞仍可生长,但时间一长,细胞的状态就变差。见下图。

细胞培养常见污染的识别及处理?

处理:细胞一旦被霉菌污染,很难挽救,两性霉素B或制霉菌素都于事无补,建议果断舍弃该污染细胞,将环境消毒。

采用酒精底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍。把水盘里加上饱和量的硫酸铜。


3、支原体:

识别:多为多边形,培养液一般会变浑浊。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是和你一起慢慢变老。支原体污染后,可影响的细胞生长参数。故进行实验前,确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。

细胞培养常见污染的识别及处理?

处理:没有什么好处理的。直接扔了吧。

4、黑蛟虫:

识别:谁都不知道所谓的“黑胶虫”是什么东西。据说是纳米级的细菌。低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去。培养液也是不浑的,一般不会太影响。但是如果太多了,也会影响细胞生长和实验结果。

细胞培养常见污染的识别及处理?

处理:因为根本不知道这是什么物种,所以也谈不上什么处理方式。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。


5、真菌:

识别:真菌污染和霉菌污染差不多。一般培养液清亮,所以很难早期发现。镜下有时候象丝状,有时候象珊瑚状。慢慢地会长出很细的黑色丝状物。这个时候,已经晚了,细胞很难救活了。

细胞培养常见污染的识别及处理?


处理:同霉菌污染一样,没有什么好处理的,直接扔了吧。然后消毒灭菌培养间,CO2孵箱,器皿和培养液。

综上所述,两个原则:预防为主,果断扔掉。如果细胞实在特别特别特别珍贵。那就只好死马当活马医了。用广谱抗生素5倍推荐浓度冲击一下。当然细胞状态差的话不熬得住。同时增加传代时的细胞的密度,培养基中的血清浓度,勤换液。也可以不加抗生素进行单克隆有限稀释至96孔板,再克隆化。

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