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qPCR到底有几种方法?

日期: 2018-08-15
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一类是染料法引物

qPCR到底有几种方法?

主要是SYBR Green为代表的非饱和染料,和LC Green为代表的饱和型染料。这类染料,你可以理解为和EB发荧光的原理差不多。就是插入双链后,就能发出荧光。

qPCR到底有几种方法?

二类是水解型的探针

Taqman的探针或者Taqman-MGB的探针。主要就是利用聚合酶的5’-3’外切酶活性,把挡在扩增道路上的探针水解掉,水解后荧光基团就和淬灭基团分离开了,这样就能产生荧光,

MGB呢,是一种淬灭基团,但是可以提高探针的退火温度,缩短探针的长度,不过成本会贵一倍多。而且是有专利的一般的引物合成公司是不能合成的。不过普遍来说Taqman探针都要比染料法qPCR成本要高。


三类是杂交型的探针

这类探针包括了Beacon(分子信标),FRET(能量共振转移),其实芯片也算是杂交型的探针,但这里我们就暂时不讲芯片了。Beacon是茎环结构的探针,在杂交后,探针的茎部打开,结合到产物上,打

qPCR到底有几种方法?

开后的荧光基团会和淬灭基团分开,产生荧光。由于Beacon的探针部分退火温度发生变化就不会产生荧光,所以一般会用来检测DNA的突变,但探针超难设计,所以用的人也不多。

qPCR到底有几种方法?

FRET也是一种杂交探针,这个挺复杂,用的是能量的转移,这需要两个探针来完成,前部的探针的3’末端结合一个荧光基团,后部探针的5’末端结合另一个荧光基团,一个荧光基团的发射光就是第二个荧光基团的激发光,也就是你点了亮一个荧光基团的话,第二个荧光基团就会亮,这样产物越多第二种荧光的两都就越大。这种方法可以定性并定量,但是成本比较高,所以一般用的人不多。

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四类就是其他

类似这个MLPA,这是利用连接酶形成不同长度片段,通过毛细管电泳进行检测的一种技术,也很少会有人用这个。

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