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PCR实验流程是怎么样的?

日期: 2018-08-08
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一、引物设计:

根据客户提供的样本种属及需检测的基因名称信息,在pubmed数据库中找出基因的源序列,再根据基因序列利用clonemanager、Premier 5软件设计出扩增所需的引物。

特殊染色的结果是怎么样?

二、RNA提取:

TRIZOL裂解样本后再用氯仿、异丙醇沉淀,使蛋白和核酸分离,提出总RNA后使用核酸定量仪测量浓度及电泳检测RNA质量。

三、CDNA逆转录:

将提取的RNA链通过逆转录酶的作用转录为单链DNA(cDNA)。

四、PCR扩增:

以cDNA样本为模板,在酶、DNTP、镁离子、引物及缓冲液的作用下进行40个循环的扩增反应,同时PCR仪在扩增过程中收集染料或探针发出的荧光并绘制扩增动力曲线。

五、数据导出和分析:

根据扩增曲线设置阈值线并导出实验数据,再将数据与参比基因对照后得出基因的表达

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