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细胞两种划痕实验对比你知多少?

日期: 2018-07-05
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一、细胞划痕实验传统实验方法

实验步骤:

将所需的材料进行灭菌,包括直尺和marker笔

1、先用marker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划横线,大约每隔0.5~1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5条线。

2、在孔中加入约5×105个细胞,具体数量因细胞种类不同而不同,接种原则为过夜后融合率达到100%。

3、第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。

4、PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。

5、放入37℃ 5% CO2培养箱,培养。可按0,6,12,24h时间点取样,拍照(具体时间依实验需要而定)。


细胞划痕实验注意事项:

1、在用PBS缓冲液冲洗时,注意贴壁慢慢加入,以免冲散单层贴壁细胞,影响实验拍照结果。

2、一般做划痕实验,都是无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略。

3、按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,可以形成若干交叉点,作为固定的检测点,以解决了前后观察时位置不固定的问题。


二、Culture Insert方法

实验步骤:

准备材料:细胞,培养液,culture Insert,镊子。


1,准备细胞悬液:根据细胞类型将细胞悬液稀释至3-7×105个/ml,浓度控制在24小时内融合成单层。

2,在培养插件的每个孔中加入70ul细胞悬液,放入培养箱中培养。

3,细胞贴壁后,使用灭菌的镊子移除培养插件。

4,加入无血清培养基培养。

5,每隔4-6小时拍照记录。

6,根据收集图片使用Wimasis分析实验结果。


细胞两种划痕实验对比你知多少?



三、细胞划痕实验对比

传统实验方法 Culture Insert方法

便捷程度 一般 非常便捷

成本 低 昂贵

划痕效果 划痕宽度不一 划痕宽度一致,可重复使用

损伤 对玻片表面包有一点损伤 可移除的插入元件,对玻片表面包

被几乎没有损伤


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