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为什么结果重复不出来?待测试剂的问题?

日期: 2017-09-21
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  做任何实验时,实验结果的稳定和可重复性对进一步得出结论是非常重要的,然而现实中经常面临的却是数据的不稳定,明明按照预实验摸好的条件进行操作,每次的实验结果却有很大差异。面对这种情况,除严格按照检测步骤进行操作外,对待检试剂特性的充分了解有时可能成为解决问题的关键所在。

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  首先,注意待检试剂的分子量以及纯度。配制特定浓度溶液时计算要准确,并且要考虑称量的可行性,如需要称量的太少而天平的敏感度过低,会降低称量准确性,此时要先配制成高浓度的母液再进一步稀释。


  其次,注意待检试剂的溶解度。要了解试剂是脂溶性还是水溶性,溶解度是多少,如果是脂溶性而实验条件是要求在水相中,那么该加何种助溶剂或进行何种操作以助溶?例如某些多肽类物质由于含有较多的疏水性氨基酸,因而具有较强的疏水性,但常规生物体体内环境中多为水相环境,因此在使用此类试剂时应特别注意其溶解程度。一般难溶于水溶剂的试剂可先使用少量DMSO进行溶解,然后再一滴一滴慢慢加入水相溶剂中进行稀释,并辅助以超声处理助溶。再如测定cAMP实验时常用到的一种磷酸二酯酶的抑制剂IBMX,先使用DMSO进行溶解,但加入到水相溶剂中时就会析出,要使用沸水浴加热并摇晃均匀使其溶解于水溶剂。当需要使用梯度浓度的待检试剂进行研究时,要注意保证最高浓度剂量组的试剂可以溶解。


  最后,待检试剂的稳定性也非常重要。要清楚待检试剂在溶液中是否容易被降解,要了解活性物质在配成溶液后能活性能保持多久,对于不能保存太久的试剂应该现用现配。此外,要注意存放条件,了解是否可反复冻融等问题,对于不可反复冻融或需要避免污染的试剂,应按每次用量分装后保存。


  因此,实验开始前充分了解待检试剂的特性对实验结果的稳定性非常重要。

 上海基尔顿生物,主营实验技术服务,如想了解更多实验内容,欢迎来电咨询18017844061,我们将热情为您服务!


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