服务电话: 400-9631-028
基尔顿生物科技 JRDUN BIOTECHNOLOGY
思想留给科学,实验外包出去
新闻动态
科研行业的发展方向
 
新闻中心 News

PCR常见问题汇总

日期: 2017-07-18
浏览次数: 45
分享到

   1.没有得到扩增产物 

(1)酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。 

(2)模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。 

(3)变性温度是否准确:PCR仪指示温度与实际温度是否相符,过高酶在前几个循环就迅速失活;过低则模板变性不彻底。

(4)反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶,应在未加Taq酶以前,将反应体系95℃加热5-10分钟。 

(5)引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化,或因储存条件不当而失活。

(6)使用PCR试剂盒时还应注意:①是否严格按照说明书操作;②试剂使用前是否充分混匀;③试剂储存过久或不当而失效。 

2.扩增产物在凝胶中涂布或成片状 

(1)酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。

(2)dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。 

(3)MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。 

(4)循环次数过多;增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用二种温度的PCR循环。

(5)退火温度过低。 

(6)电泳体系有问题:①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大;②凝胶没有凝固好;③琼脂糖质量差。 

(7)若为PCR试剂盒则可能:

①由于运输储存不当引起试剂盒失效; 

②试剂盒本身质量有问题,如引物选择、循环参数等选择不当。 

(8)降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。 

3.溴酚蓝前有区带(很宽) 

(1)模板量太低。增加模板DNA的用量。 

(2)循环次数太多。减少循环次数。

(3)复性度偏低。提高复性温度。 

(4)预变性后没有立刻上机循环。 

(5)引物3'端是否互补;重新设计合成较长的引物。 

(6)引物用量偏多。降低引物的使用量。 

4.扩增产物出现多条带 

(1)引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。 

(2)循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。 

(3)酶的用量偏高或酶的质量不好,应降低酶量或调换另一来源的酶。 

(4)退火温度偏低,退火及延伸时间偏长。应提高退火温度,减少变性与延伸时间,也可采用二种温度的PCR扩增。 

(5)样品处理不当。 

(6)Mg2+浓度偏高,因适当调整Mg2+使用浓度。 

(7)若为PCR试剂盒,也可能时试剂盒本身质量有问题。

 

目前,上海基尔顿生物,主营实验技术服务,如想了解pcr实验的更多内容,欢迎来电咨询4009631028!

  • 扫码关注
    扫码关注
    扫码关注
基尔顿生物科技(上海)有限公司    版权所有
客服电话:021-55130726邮箱:jierdun@jrdbio.com
地址:上海市长江南路180号长江软件园B区B638室

X
3

SKYPE 设置

4

阿里旺旺设置

5

电话号码管理

  • 400-9631-028
  • 18017844061
6

二维码管理

展开