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细胞实验中常见问题

日期: 2017-06-08
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1. 实验室材料须无菌处理
   交叉污染是细胞实验过程中的最常见问题。哪怕是最轻微的污染,也可能会导致了几个星期努力的成果付诸东流。培养箱内温湿皆宜的生活环境,是目标材料的的天堂,但也是真菌细菌等常见微生物的安乐窝,定期清洁消毒清除这些不速之客是确保尊贵的实验细胞安全的必要措施。此外,在将培养瓶、移液管及其他的相关物品放入超净台之前,应用酒精擦拭干净,净身入户,远离污染。
   2. 小心处理您的培养物
   细胞培养的实在是脆弱。要轻拿轻放,温度变化不要太大。确保培养箱水平放置,温度恒定,远离电动仪器。此外,尽量操作专一,避免一次处理多个细胞系,否则它有可能会影响细胞的基因型和表型。定期对常用细胞作STR图谱分析,以确认细胞系的身份,如果没及时确认是对的细胞,那么长期以来用此细胞做的实验结果可是很尴尬的哦!
   3. 正确解冻细胞
   复活细胞,也要小心,长时间暴露在高温条件下,会造成细胞无法铺板。因此,冻存管应在水浴中放置时间要把握好,然后用条件培养基稀释,避免DMSO对细胞造成伤害。
   4. 使用对数生长期的细胞
   对数期的细胞是最具活力的,能够快速分裂,细胞在对数期以70-80%的汇合度存在。
   5. 传代之前不能让细胞完全汇合
   汇合度是指贴壁细胞占据培养瓶表面积的比例。完全汇合意味着培养瓶表面全部被贴壁细胞覆盖。它意味着细胞细胞的生长空间已经全都是有主的,不能再接纳新的细胞成员。细胞的增殖就会停滞。既然是要用来传代,就不能使用这种状态的细胞。所以传代之前不能让细胞完全汇合哦。
   6. 开发最佳培养基
   在细胞培养过程中,培养基是控制产品质量、产量和成本的最重要因素。必须针对每种培养物来定制培养基,以优化实验结果。可以购买现成的,可以自己开发,也可以与别的单位合作开发特定的培养基。在这个过程中,需要考虑的是时间和成本等因素。
   7. 评估干粉培养基水的质量
   液体培养基一般会比干粉培养基使用效果好。这可能与水的质量有关。商业公司有资源来监控和控制细菌生长,比如过滤器。因此使用商业化生产的液体培养基会更加可靠一点。
   8. 利用细胞的代谢特性来优化培养基
   分析使用过的培养基,有助于鉴定必要成分的代谢速率,包括氨基酸和维生素。从细胞生长阶段和蛋白生产阶段收集到的动态代谢图谱可用来平衡基础培养基和添加培养基,有助于蛋白质的生产。
   9. 避免细胞的过度消化

细胞暴露在胰酶中时间过长,胰酶将开始切割细胞表面蛋白,这会影响细胞正常的功能。
   10. 培养基中抗生素的使用
  细胞实验中长期使用抗生素 ,将会造成抗生素耐药菌株开始出现。

 

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