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实验进行前,超净台用紫外灯照射30-60min,然后用75%酒精擦拭超净台台面,并开启超净台风扇运转10min左右再开始实验操作。实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内;实验用品用完应移出超净台,以利于气流的流通。实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。每次操作只处理一种细胞;即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基,避免细胞间的交叉污染。操作时小心取用无菌的物品,避免污染。勿碰触吸管尖头,不小心碰触后应立即更换;不要在打开的容器瓶口正上方操作,容器打开后,倾斜45°操作,操作完成后及时盖上瓶盖。CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方,应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次,用双蒸水清洗,再用酒精棉球擦拭一遍,最后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水(应每周更换),待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。课题设计、基金申请、文章润色、实验外包  基尔顿生物欢迎您的咨询!
发布时间: 2018 - 11 - 12
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1.长时间水浴解冻因为原代细胞非常容易受到解冻过程的影响,所以在37℃水浴锅中解冻时,要在水中摆动溶解。在细胞半溶后(不要等到全部溶解),迅速拿到生物安全柜或超净台中,用1ml的枪,抽出事先准备好的完全培养基打入冻存管中,然后抽到培养瓶中,反复进行,直至完全溶解。2.把冻存管的细胞溶解后迅速离心如果原代细胞溶解后马上离心,细胞所受的打击可能比DMSO的毒性还要大,不建议采用这个方法。用带有血清的完全培养基溶解后铺瓶,第二天换液去除DMSO。3.让原代细胞长满(100%)瓶(皿、板)原代细胞长满后,细胞会出现老化。因为原代细胞不是100%的细胞团,把混入的细胞控制在最小限度非常重要。建议细胞长到90-95%进行传代。4.传代时用大量的胰蛋白酶处理原代细胞传代时,要用低浓度的胰蛋白酶消化,在显微镜下看到细胞开始变圆、脱落后迅速终止胰蛋白酶。建议采用含10%血清的完全培养基终止或大豆由来的蛋白酶终止剂终止。5.细胞培养后再冻存原代细胞再冻存后,细胞会老化、也可能引起机能变化,所以不建议再冻存。细胞再冻存也是细胞死伤的主要原因。6.原代细胞无限增殖原代细胞和细胞系不同,增殖能力是有限的。为了防止遗传上的变化,最好尽快开始做实验。另外,为了防止混入杂细胞比例的增加,要经常观察细胞形态。课题设计、基金申请、文章润色、实验外包 基尔顿生物欢迎您的咨询!
发布时间: 2018 - 11 - 08
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1、细菌:识别:细菌在显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,有球形,链形,杆形等。大家不必深究。只要发现培养液浑浊变黄,培养瓶顶部有一层细沙一样的东西。就知道大事不好啦。见下图。处理:可在培养液中加相应的抗生素处理。可以用四环素,庆大霉素,或者链霉素,前两者的工作浓度是50 μg/mL;链霉素的工作浓度是100 μg/mL。其实,毛毛虫说句实话,一旦发生污染,就已经大势已去了。如果细胞不是特别特别珍贵的话,还是趁早扔了,重起炉灶吧。所以,最重要的还是防范于未然。做好培养间,CO2孵箱,器皿和培养液的消毒灭菌工作。在操作的时候,严格执行无菌操作规范。2、霉菌识别:因为培养液是清亮的,所以霉菌污染非常难以早期发现,等发现时往往已经为时过晚了。培养液中慢慢地出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,如同风中柳絮。细胞仍可生长,但时间一长,细胞的状态就变差。见下图。处理:细胞一旦被霉菌污染,很难挽救,两性霉素B或制霉菌素都于事无补,建议果断舍弃该污染细胞,将环境彻底消毒。采用酒精彻底底地擦洗一遍CO2孵箱。然后再用新洁尔灭擦洗一遍。把水盘里加上饱和量的硫酸铜。3、支原体:识别:多为多边形,培养液一般会变浑浊。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是和你一起慢慢变老。支原体污染后,可影响所有的细胞生长参数。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实...
发布时间: 2018 - 11 - 07
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