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细胞转染实验技术原理:细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。 因为不同的细胞在生理代谢及分裂上均存在差异,因此研究者将外源遗传物质导入细胞的过程中需要选择不同的方式。目 前,将外源物质导入细胞的方法主要分为三大类:1、脂质体(或是脂质体替代物)转染;2、电转;3、病毒感染。这三种方法互有优劣。脂质体或是脂质体替代 物转染操作简便,价格低廉,但是对细胞毒性大。而且,有些细胞通过脂质体转染效率很低;电转操作方便快捷,但是需要专门的仪器,对细胞损伤也比较大;病毒 感染克服了前两者的劣势,感染效率高,对细胞毒性小,但是病毒前期包装需要大量的时间和精力 。细胞转染实验服务操作流程:1、转染试剂的准备a. 将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10秒钟,溶解脂状物。B. 震荡后将试剂放在-20摄氏度保存,使用前还需震荡。2、选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体[1] 体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。3、将混合液在室温放置10―15分钟。4、吸去培养板中的培养基,...
发布时间: 2018 - 10 - 15
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1胶片是一片空白,是怎么回事?答:如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。1)二抗的HRP 活性太强,将底物消耗光;2)ECL底物中H2O2不稳定,失活;3) ECL底物没覆盖到相应位置;4)一抗选择不当;5) 二抗失活。2背景高咋回事?答:可能的原因有:膜没有完全均匀湿透,建议 使用100% methanol浸透膜;洗膜不充分,可以增加洗液体积和洗涤次数;电极不平衡或者加样位置偏斜,可以调整电极和加样;封闭物用量不足,可以提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜;封闭物使用不当,比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭;封闭时间不够,一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜;7)抗体非特异性结合,可以降低抗体浓度,减少孵育时间8)一抗稀释度不适宜,可以对抗体进行滴度测试,选择最适宜的抗体稀释度9)一抗孵育的温度偏高,建议4℃结合过夜10)抗体浓度过高或洗涤不够,建议降低抗体浓度,增加洗涤次数和时间11)化学显色底物过多,建议按说明书加入适量的显色底物3为啥条带形状不好看?答:可能的原因有:1)胶凝的不均匀或聚合不好,建议灌胶前将溶液充分混匀2)某些样品盐浓度较高,建议除盐或将样品盐浓度调成一致3) 缓冲液陈旧,成分改变,可以重配4) 凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走5)电泳时温度过高,可以降低电流或电压6)样品中含有不溶性颗粒,建议样...
发布时间: 2018 - 10 - 12
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首先,确定综述题目。一般选择与自己科研课题相关的题目。可以选择研究课题的全面情况描述,也可就某一侧面或者某一应用方法具体描述。题目切忌过大,越具体越明确越好。 确定好了题目之后,就要开始收集有关文献了。收集文献时,需注意以下几点:注意充分了解该课题在相关领域的最新进展;了解与该课题相关的材料,总结所读文献的主要内容;在阅读过程中,亦可模仿好的文献综述的写法;总结自己写文献综述的方法和套路,形成一套完整的写作流程。收集整理完资料,就要开始动笔了。可以先列出写作提纲,将小标题写好,在每个小标题下写出要描述或讨论的具体方面和问题。标出引用的参考文献。按照前言、正文、总结、参考文献几个方面将文章大致完成初稿。之后再认真推敲每个段落、每个句子。 撰写前言:首先要交代清楚写作的目的、研究领域以及目前的研究进展,其次阐述有关研究中的概念,最后交代清楚本综述的框架。 主体部分:主体部分可以采用按照文献发表的时间顺序描述纵向分析,也可以按照同一问题观点,不同方法进行比较。总之就是将所收集的文献进行归纳、整理及分析比较。但记住,述而不评。对原始文献、数据、观点客观分析即可,不掺入自己的评价、预测和建议。 总结部分:简明扼要地总结全文,记得要与前言前后呼应。最后写清本课题的研究意义,目前存在的分歧和主要问题以及未来发展趋势。 参考文献书写格式:文献的编排...
发布时间: 2018 - 10 - 11
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