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一、环境因素无菌环境无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内,解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵,但细胞在体外培养的过程中,缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖,必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。常见的微生物污染有支原体、细菌、真菌。支原体无致死毒性,可与细胞长期共存,对细胞有潜在影响,但体积小,不易鉴别,可借助于地衣红或Hoechst33342染色来进行检测。细菌增殖快,在短时间内即可大量扩增,并产生毒素杀死细胞。真菌的种类繁多,肉眼可见,漂浮于培养液面上,可呈丝状、管状或树枝状等。合适的温度一般哺乳类与禽类细胞在体外培养的适宜温度是37~38,不适宜的环境温度会影响细胞的生长。细胞对低温的耐受能力要强于对高温的耐受能力,在低温下,细胞的代谢活力及核分裂能力降低。若温度不低于0,虽然细胞代谢受到影响,但无损伤作用;25~35时,细胞以缓慢的速度生长;但若被置于40数小时,则不仅不利于细胞生存、生长,甚至可导致其死亡。适宜的渗透压高渗溶液或低渗溶液会引起细胞发生褶皱、肿胀、破裂。因此,渗透压是体外培养细胞的重要条件之一。多数体外培养的细胞对渗透压都有一定的耐受能力,实际应用中,260~320mmol/L的渗透压可适用于大多数细胞。气体环境与pH细胞的体外培养...
发布时间: 2019 - 07 - 31
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一、实验器材1.样品(1)血清:用于Es-1和Trf两位点检查。(2)溶血清:用于检查Hbb、Car-2和Ldr-1位点。(3)肾匀浆:用于检查Es-2、Es-3、Idh-1、Mod-1、Akp-1、Pgm-1、Pep-1、Gpd-1、Gpi-1、Ce-2位点。(4)尿液:一般在早上8~9时取鼠原尿,做一倍稀释后方可使用,用于Mup-1位点的检查。2.缓冲液:略。3.染色液:略。4.点样品一套,电泳仪一台,电泳槽一个,乙酸纤维薄膜若干张。5.滴管、管架、直径10cm培养皿、普通滤纸、烧杯各二个。二、实验方法和步骤1.实验方法我们采用的是水平乙酸纤维薄膜电泳法即用普通滤纸做盐桥,在低温常压下的电泳。2.实验步骤(1)把电泳缓冲液加入电泳槽内到红线位置,盐桥滤纸对折后用订书机将其同定在桥架上,然后加盖置于4℃冰箱或相应冷室里预冷。(2)从低温(-20℃)冰箱中取出样品,于室温下自然解冻,并同时将乙酸纤维薄膜裁成适当大小投入缓冲液中浸泡湿透。(3)从缓冲液中取出乙酸纤维薄膜夹于两张普通滤纸间,用手轻压滤纸,以吸去薄膜上的多余缓冲液。(4)样品解冻后,用弯头滴管吸取少量样品液于点样板上的小方格内,并依序记下样品号码,再用点样刷蘸取适量样品液点在乙酸纤维薄膜粗糙面距边缘1.5cm处,之后迅速转入电泳槽内,按规定方向(缓冲液pH值大于5.6的,样品的电泳方向是由负极向正极泳动,若pH值小于或等...
发布时间: 2019 - 07 - 30
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1.跑台有氧力竭运动动物模型复制方法  选用健康雄性SD大鼠,体重为250~300g。采用观察性指标(同前)来判断动物是否疲劳及疲劳的程度。实验大鼠以18m/min的速度进行中等强度的水平跑运,持续时间为200min,运动过程中采用声音和毛刷实施刺激。实验大鼠的一般状况、跑的动作和运动能力变化较为明显。在运动过程中,需要较多的刺激次数和延长刺激时间,才能维持原强度工作。为了诱发实验大鼠的运动能力进一步下降,在200min运动的中间(一般在第100~120min),当大鼠的运动能力明显下降时(刺激频率为6次/min),取出大鼠进行短暂休息(一般为5min),然后继续运动,直至不能维持原工作强度,大鼠表现为明显的力竭症状。以此可作为有氧运动力竭动物模型。2.游泳力竭运动动物模型复制方法  选用健康雄性SD大鼠,体重为250~300g,采用尾部负重的游泳方式建立力竭运动动物模型。负重重量为体重的3%,泳池水深50cm,水温(31±1)℃,每平方米水面可同时容纳5~6只大鼠游泳。当大鼠游至连续3次没入水底,每次超过10s,视为力竭。课题设计、基金申请、文章润色、实验外包  基尔顿生物欢迎您的咨询!
发布时间: 2019 - 07 - 26
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