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1、传统ES打靶基因敲除——成熟、修饰准确、效果稳定,但制作周期长达一年基于胚胎干细胞(ES)的同源重组技术俗称“传统的基因打靶技术”。因具有技术成熟、修饰准确、效果稳定等优点而受到众多科学家一致好评,此外,世 界上所有重要的的基因敲除小鼠模型均通过此技术制备。尽管新兴核酸酶修饰技术如ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等相继出现,但基于ES细胞的 同源重组技术依然是唯一可以满足所有基因组修饰要求的技术。基因打靶就是通过同源重组技术将外源基因定点整合进靶细胞基因组上某一确定的位点,以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。基因打靶技术目前已 被广泛认为是一种理想的特定修饰与改造生物体遗传物质的最佳方法,其中包括了多种不同的基因敲除和敲入系统,特别是条件性和诱导性基因打靶系统的建立,使 得对基因在时间和空间上的靶位修饰更加明确、效果更加精确可靠。但其存在周期长的缺陷,通常制作周期10-12个月。2、TALEN基因敲除——周期短,但存在马赛克现象和脱靶现象TALEN技术是一种新的分子生物学工具。科学家发现,来自一种植物细菌的TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关 系。利用TAL的序列模块,可组装成特异结合任意DNA序列的模块化蛋白,从而达到靶向操作内源性基因的目的,它克服了ZFN方法不能识别任意目标基因序 列,以及识别序列经常受上下游序列影响等问题,...
发布时间: 2019 - 05 - 15
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备用背根损伤动物模型,或者说去传入模型,是研究脊髓损伤的一种常用动物模型,去背根动物对应脊髓后角的中间神经元失去了浅感觉初级传入纤维的支配和刺激;而深感觉传入纤维失去了与其自身胞体的连接。从而导致去背根动物的感觉功能障碍。中枢神经损伤后的可塑性研究始于1958年,Liu和Chambers用备用背根动物模型首先发现了侧支出芽现象。1969年,Raisman报道了神经回路网可塑性的实验成果。他们的发现都属于代偿现象,并不是真正意义上的再生,但他们为脊髓损伤后的治疗带来了曙光。其经典的制作方法为:将手术动物逐层切开皮肤、筋膜、肌肉,分离横突外侧的肌肉,清楚地暴露横突和关节突,小心去除椎间孔处的上、下关节突,并剪除双侧的L1~L4和L6背根节,只保留L5背根节,即留下一个作为备用的背根。据报道,备用背根中假单极神经元的中枢突会在一定环境刺激和内在基因调节下发生出芽现象来代偿受损传入纤维的作用,并最终可能重塑神经回路。使受损脊髓的功能得以代偿并在一定程度上恢复功能。在此过程中,脊髓后角和残留背根节在分子水平发生了一系列复杂的变化。而此复杂变化、残存背根节侧支出芽的机制是神经科学界研究的一大课题,也使得该动物模型成为研究轴突侧支出芽机制的工具。目前。已有学者建立了大鼠、猫等动物的备用背根模型,并开展了系列研究。课题设计、基金申请、文章润色、实验外包 基尔顿生物欢迎您的咨询!
发布时间: 2019 - 05 - 14
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发布时间: 2019 - 05 - 13
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