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目前神经毒性检测主要是依赖活体动物实验。这不但在伦理方面受到限制,而且通常在经济上非常昂贵,时间精力上十分耗时费力,当需要大规模测试化合物的时候就难以让人接受了。因此,高通量的体外的神经毒性测试就变得十分必要了,这样不仅可以直接使用人源细胞进行试验,而且试验结果的实用性也更佳。 但是,到目前为止,使用人源干细胞进行诱导的神经元并不具有进行这类试验的特质,试验时间太长,批次间的差异较大,并且有还会伦理和相关法律上的的约束,使得这种细胞都不太适合大规模的体外测试试验。最近,市面上出现了商用的人源iPSC-derive神经元细胞,重复性好,可以用来做这类的体外神经毒性试验。荷兰的科学家使用人源iPSC-derive神经元细胞做了免疫荧光染色试验,作为进行高通量体外的神经细胞毒性检测的预试验。人源iPSC-derive神经元细胞混合培养能够形成不同(激活型或抑制型)神经元共培养的样本。 目前,上海基尔顿生物,主营实验技术服务,如想了解免疫荧光的更多内容,欢迎来电咨询18017844061
发布时间: 2017 - 06 - 09
浏览次数:30
开始细胞传代前,仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全:一般主要有:细胞(单层细胞,镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH 培养液或MEM 培养液或199 等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液(1 万单位)、7.5%NaHC03 溶液、0.25%胰蛋白酶、PBS 洗液。用具:小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1)、细胞吹打管(20 ml)(以上用具需经121℃至少15 分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱细胞传代操作步骤:镜检细胞,挑选生长状态良好,细胞界限清晰,具有立体感,形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。配制细胞培养液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培养液100ml 内,加入灭活小牛血清10m1,庆大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氢钠溶液3ml。(仅供一般参考)。消化细胞;先用PBS 洗液冲洗细胞表面1-2 次,每次10m1,弃去洗液,向细胞瓶内加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,细胞瓶平放,使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1 细胞培养液吹打分散细胞,按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 细胞培养液重复吹打一次后分装,然后补加至所需培养量。加塞,置于37±1℃孵箱培养。约2~4 天成片。(由细胞接种浓度决定);填写传代记录。...
发布时间: 2017 - 06 - 09
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1. 实验室材料须无菌处理   交叉污染是细胞实验过程中的最常见问题。哪怕是最轻微的污染,也可能会导致了几个星期努力的成果付诸东流。培养箱内温湿皆宜的生活环境,是目标材料的的天堂,但也是真菌细菌等常见微生物的安乐窝,定期清洁消毒清除这些不速之客是确保尊贵的实验细胞安全的必要措施。此外,在将培养瓶、移液管及其他的相关物品放入超净台之前,应用酒精擦拭干净,净身入户,远离污染。   2. 小心处理您的培养物   细胞培养的实在是脆弱。要轻拿轻放,温度变化不要太大。确保培养箱水平放置,温度恒定,远离电动仪器。此外,尽量操作专一,避免一次处理多个细胞系,否则它有可能会影响细胞的基因型和表型。定期对常用细胞作STR图谱分析,以确认细胞系的身份,如果没及时确认是对的细胞,那么长期以来用此细胞做的实验结果可是很尴尬的哦!   3. 正确解冻细胞   复活细胞,也要小心,长时间暴露在高温条件下,会造成细胞无法铺板。因此,冻存管应在水浴中放置时间要把握好,然后用条件培养基稀释,避免DMSO对细胞造成伤害。   4. 使用对数生长期的细胞   对数期的细胞是最具活力的,能够快速分裂,细胞在对数期以...
发布时间: 2017 - 06 - 08
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