1.实验材料SD大鼠，细胞培养板，培养皿，小牛血清等2.实验步骤之固定1 . 组织取材 SD 大鼠乙醚吸入麻醉后腹腔内注射氯胺酮(22 mg/kg)。 以左侧第 4 肋水平作横切口, 取胸大肌约 1 cm3 , 并将其修剪成 1 mm3 大小的肌小粒 。反复用Hanks 液洗去血细胞 , 将肌小粒小心贴附于事先用明胶包被的细胞培养瓶底部 , 加入适量成肌细胞增殖培养液(Ham' s F-10 培养基中加入15 %小牛血清、青霉素100 U/ml 、链霉素 100 U/ml)。将瓶底向上轻置于37℃、5 %CO2 、饱和湿度的培养箱中, 4 h 后轻轻翻转培养瓶 , 使肌小粒浸浴于培养液中。 3 d 换液一次 , 待细胞长满瓶底即可传代。 2 .成肌细胞的培养 采用组织块培养法贴块 2 d 后即可见有细胞从肌小粒边缘爬出 , 细胞呈梭形, 胞浆透明。1 周后细胞可长满瓶底的 60 %～ 70 %, 其数目可达 105 , 此时细胞可呈多角形 , 充分伸展, 部分细胞密集区可见细胞呈向心性生长 , 相互间排列整齐 , 类似骨骼肌的纵切面。 3 .成肌细胞的分化鉴定 将传代后的细胞接种至 6 孔板, 加入增殖培养液 , 待细胞长至80 %满时, 换入成肌细胞诱导分化液(低糖DMEM培养基中加入 2 %马血清、0 .5%鸡胚提取物、青霉0100...
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2018
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