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1.收到细胞,第一时间要镜检:观察细胞形态是否正常,对于贴壁细胞则要注意看贴壁情况是否很好,观察细胞密度,有疑议及时咨提供细胞的技术人员。 由于运输的时间或者温度的变化,很多贴壁细胞在盛满培养基的瓶子里生长的状态和平时会有点不一样,主要是贴壁牢固问题。比如293T,平时贴壁就不是很牢,在装满的培养基瓶子里面,会发生大片的脱落,细胞聚集在一起,但是细胞生长还是正常的,通过离心收集,加以胰酶的消化,重新打散,又可以正常的贴壁生长。2.当通过上一步的观察,细胞初步没有任何问题时,进行下一步操作。当收到的细胞密达到80%左右时,则处理如下:弃除瓶中大部分培养基,仅保留5到10mL培养所需的常规培养基;或更换新鲜的培养基,置于培养箱中,随后每天观察。 细胞在低于正常生长温度情况下,会调整为静止期,或者慢速生长期,必须恢复37度的环境至少3个小时左右,才能重新调整到接近对数生长期的状态,在对数生长期进行细胞的传代会大大增加传代的成功率,和细胞的存活率。3.如果经第一步观察发现细胞密度超过90%,并且细胞状态很好时,则复温后2个小时需要立即传代。传代的比例应依据不同的细胞而定。对于生长比较快,状态稳定,不易受外界影响的细胞可以一次多传几瓶;对于生长较慢,细胞比较薄,状态容易波动的细胞类型,一次少传些,保证每瓶细胞密度大些,便于稳定生长。至于一些比较陌生的细胞,第一次处理也可以依照第二种情况。&#...
发布时间: 2018 - 11 - 05
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1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件?ATCC(American Type Culture Collection)收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料。2.如何选用特殊细胞系培养基?培养某类型细胞没有固定的培养条件。MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样容易生长。总之,首选MEM、DMEM做贴壁细胞培养;RPMI1640做悬浮细胞培养;各种目的无血清培养首选AIMV培养基(SFM)。新的细胞培养时要详查资料。3.自己新配制的液体培养基能保存多久?我们建议将新配制的培养基放置于4℃,避光保存尽量在一周内使用完毕。培养基越新鲜越好。4.培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在一到两周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。5.培养基中是否须添加抗生素?除了特殊筛选系统外,一般正常培养状态下,培养基中不应添加任何抗生素。为防止细菌、真菌污染,可以加入青霉素-链霉素双抗溶液,其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml,链霉素为100ug/ml。  6.液体培养基可以放-20℃保存吗?不可以!因为在-20...
发布时间: 2018 - 11 - 02
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实验原理:将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时 也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。实验仪器培养箱(调整至37℃)、培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)实验试剂: 1640培养基或DMEM培养基、胎牛血清、0.25%胰酶、Hank′s液、碘酒、75%酒精实验步骤:一、原代细胞培养步骤1、准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2、布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。3、处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30-60分钟。4、剪切:用眼科剪把组织切成2-3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。5、消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消...
发布时间: 2018 - 11 - 01
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