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下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下siRNA转染步骤(24孔板)1.提前1天细胞种植贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么就用2×105的细胞进行转染。2.转染过程  取0.67ug(50pmol)的siRNA,加入一定量无血清稀释液,充分混匀,制成RNA稀释液,终体积为25μl。注意:无血清稀释液建议采用OPTI-MEM、无血清DMEM或1640。取1ul的Entranster-R4000,然后加入24ul无血清稀释液体,充分混匀,制成Entranster-R4000稀释液,终体积为25μl。室温静置5分钟。将Entranster-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合(可用振荡器振荡或用加样器吹吸10次以上)混合,室温静置15分钟。转染复合物制备完成。将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基(可含10%血清和抗生素)的细胞上,前后移动培养皿,混合均匀。注意:对本试剂,采用含血清的全培养基有助于提升转染效率。转染后6小时观察细胞状态,如状态良好可不必更换培养基,继续培养24-96小时得到结果。课题设计、基金申请、...
发布时间: 2019 - 06 - 11
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01稿件的主题是否适合于期刊所规定的范围:为确认哪些期刊能够发表自己的论文,作者首先应在SCI、Scopus数据库进行检索分析;其次,要认真阅读准备投稿期刊的作投稿须知,尤其要注意其中有关刊载论文范围的说明,还要仔细阅读最近几期拟投稿期刊的目录和相关论文,以确认是否与自己的稿件的内容相适应。由于不同学科的影响因子存在很大的差异,因此,选择投稿的期刊应注意避免过于看重期刊的影响因子。有时尽管期刊的影响因子很高,作者所投稿件的内容也非常优秀,但因为期刊与稿件的主题不适合,从而使得稿件难以得到录用和发表。02期刊的读者群:要了解目标期刊的阅读人群,是侧重临床还是基础,作者需要考虑将论文发表在最合适的期刊中。03期刊的学术质量和影响力如何,录用率是否适当:利用JCR检索该期刊的总被引频次和影响因子来了解期刊的学术影响力,即期刊的总被引频次和影响因子(IF)越高,则表明期刊被读者阅读和使用的可能性越大。进而可推断改期刊的潜在的学术影响力也越大。要判断期刊对来稿的录用率和倾向性时,可以在SCI数据库检索分析统计该期刊中论文作者的国家来源,帮助作者选择确定投稿期刊。04期刊的编辑和印刷质量如何:稿件自被接受至发表的时间在选择期刊时也需要考虑。根据拟投稿的期刊论文的收稿日期和接受日期及期刊的出版日期来推测。05期刊是否收发表版面费:期刊是否收版面费和彩版制作费、审稿费和抽印本制作费。此外,投稿的方...
发布时间: 2019 - 06 - 06
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1、内容格式有问题。不同的期刊、杂志有不同的风格特色,如果你的论文内容和投稿杂志格式相差很大,可能审稿人就不会感兴趣,会认为你对他们杂志关注、了解很少,不够真诚,第一感觉不好的话就会影响到审稿结果。2、论文数据不真实。论文数据必须真实可靠,很多审稿人都具有敏锐的慧眼,根据一些数据的推理就能看出上下文的逻辑关系,进而发现问题的所在之处,一旦发现数据来源不可靠,就会找出你的问题,认为你论文缺少严谨性,要过审稿这关就很难了。3、表述问题。表达很重要,好的表达让人看了很舒服,也很容易懂。很多专家都是写作高手,招博士生时也很注重论文功底。写好论文后,你还要推敲推敲,看是否清楚到位,不要因为自己的表述让人产生模糊不清的概念。因此,在自己的论文完稿后,还要多加检查,避免低级错误,力求表述准确,推断合理,达到合格水平。4、论据不够充分。写论文是需要论点、论据相结合的,如果提出的论点没有充分的论据进行佐证,就容易产生逻辑推理问题,论文写起来不顺畅,到处是缺陷。5、没有列出提纲。论文写作之前,先参考同类医学SCI论文的写作方法,在脑子里构思好论文的整体结构,并列出详细的提纲,防止在写作过程中跑题。6、不留意摘要。跟国内医学论文一样,摘要是必须写的,要高度概括论文的意义、内容和特点。SCI论文的摘要中文500字左右,英文300-500个单词左右。不要太啰嗦,也不要太短而说不清楚。7、评价他人不谨慎。在评...
发布时间: 2019 - 06 - 05
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