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一、准备工作 准备工作对开展细胞培养构建异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试。二、取材 在无菌环境下从机体取出某种组织细胞(视实验目的而定),经过一定的处理(如消化分散细胞、分离等)后接入培养器血中,这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养,实际上幼体组织(尤其是胚胎组织)比成年个体的组织容易培养,分化程度低的组织比分化高的容易培养,肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。三、培养 将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养,则直接将组织块接入培养器皿底部,几个小时后组织块可贴牢在底部,再加入培养基。如系细胞培养构建,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,按要求以一定的量(以每毫升细胞数表示)接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中...
发布时间: 2018 - 11 - 30
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一、无菌室无菌室的结构:一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。无菌室的消毒和防污染:为保持无菌状态,经常消毒是必要的,通常采用每日(使用前)紫外照射(1-2小时),每周甲醛、乳酸、过氧乙酸熏蒸(2小时)和每月新洁尔灭擦拭地面和墙壁一次的方式进行消毒。实际工作中,要根据无菌室建筑材料的差异来选择合适的消毒方法。此外,还应注意防止无菌室的污染。造成无菌室污染的可能包括:送入无菌室的风没有被过滤除菌;进出无菌室时,能使外界空气直接对流进无菌室的操作间;等。二、超净工作台工作原理:鼓风机驱动空气通过高效过滤器得以净化,净化的空气被徐徐吹过台面空间而将其中的尘埃、细菌甚至病毒颗粒带走,使工作区构成无菌环境。根据气流在超净工作台的流动方向不同,可将超净工作台分为侧流式、直流式和外流式三种类型。超净台的使用与保养:超净台的平均风速保持在0.32-0.48米/秒为宜,过大、过小均不利于保持净化度;使用前最好开启超净台内紫外灯照射10-30分钟,然后让超净台预工作10-15分钟,以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态;使用完毕后,要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净,以保证超净台无菌。还要定期用福尔马林熏蒸超净台。第四节 常用培养器皿及清洗消毒细胞培养需要大量消耗性物品,如玻璃器皿、金属器皿、塑料、橡胶制品、布类、纸类等,因此掌握清洗、消毒知识,学会清洗、消毒方法是从事细胞培养工作必须的。一、清...
发布时间: 2018 - 11 - 28
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1. 公司资质证书各种资质证书是公司实力的标志,资质证书完备的公司内部管理制度完善,工作流程规范,更注重客户的需求和自己的口碑。2. 是否有自己的实验室相信各位选择实验外包最关注的就是数据真实性问题,试问一个连实验室都没有的公司如何做到给你一个真实可靠地实验数据呢?有些公司将项目拆分,承接给不同的高校实验室,往往会出现效率慢、实验结果不理想、权责关系不明确等问题。3. 是否能承接整体实验这一点取决于外包的是单项检测还是系统性的课题或项目。例如全基因组测序、基因芯片等单项检测当然是委托信誉好的测序公司来做。如果是一个完整的课题,那就要选择一个能承接整体实验能力的公司,很多公司只能承接部分实验项目,如果一个课题包给几个公司去做,不仅沟通繁琐,一旦拿到的数据结果相悖,将很难找到原因。4. 签约前的实验路线沟通前期没有对方案进行技术路线评估、沟通、优化的公司,除了不负责任还有可能将项目分包出去,同时合同上实验路线细节不够清晰,后期实验出现问题还要浪费时间和精力在扯皮上。5. 方案报价是否清晰明了在签约时如果合同是整体项目报价而没有单项报价,这一点需要引起注意,如果后续需要增加实验续签合同,可能会出现一定的费用上的分歧。6. 关于价格报价低于成本价格的公司一定不能选择,真正做实验的公司不会有太大的利润空间。一定要在前面提到的关键问题都明确后,再去比较价格,毕竟实验外包要的不仅是一个结果,在这...
发布时间: 2018 - 11 - 27
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