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(1) CC1诱导方式选取40%CC1溶液,按照每千克两毫升的剂量,对大鼠腹腔内进行注射,每周连续性注射两次,一共注射八周,可以将大鼠内部肝纤维化模型成功复制。CC1溶液是氯化烷类的相关化合物,他会有选择性的损害动物内部的肝脏,对于动物内部的肾脏产生直接影响,同时当它进入到动物体内之后,可以直接进入到肝脏细胞,溶解肝脏细胞上膜成分。也可以成功进入,体内对肝细胞色素进行沉淀,混合性产生代谢,生成甲基自由基,启动过氧化作用,导致整个肝细胞损伤坏死,长期进行复制,可以诱导肝纤维化形成,这是一种目前为止,在医学范围内应用zui为典型的动物怎么方法。整个方法造模价格十分便宜,方式简单,造模时间较短,对于研究肝纤维化病变具有可靠性,目前为止,这种动物造模研究已被应用于肝纤维化细胞分子治疗中,但该模型有待进一步探讨。(2) 半乳糖胺诱导方式选取半乳糖胺以每千克500毫克的剂量注射到大鼠体内,每隔一天注射一次,连续性的注射12周。可以复制肝纤维化模型。 半乳糖胺能够导致肝脏损伤,他主要的原理是干扰肝脏内部核苷酸以及蛋白质合成,造成肝脏内部毒素血症,产生氧自由基以及过氧导致的干膜障碍。能够损伤线粒体。这种方法操作相对简单,时间耗费适中,具有高度复制性,适合保护肝脏的动物,目前,这种方式可以研究脂肪肝以及肝纤维化的相关临床医学研究。可以研究动物造模有效发病方式,以及它们之间的关系。(3) 乙...
发布时间: 2018 - 12 - 13
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组织石蜡包埋切片实验步骤1、取材:新鲜组织固定于4%多聚甲醛24h以上。将组织从固定液取出在通风橱内用手术刀将目的部位组织修平整,将修切好的组织和对应的标签放于脱水盒内。2、脱水:将脱水盒放进吊篮里于脱水机内依次梯度酒精进行脱水。75%酒精4h-85%酒精2h-90%酒精2h-95%酒精1h-无水乙醇I 30min-无水乙醇II 30min-醇苯5-10min-二甲苯I 5-10min-二甲苯II 5-10min-蜡I 1h-蜡II 1h-蜡III 1h。3、包埋:将浸好蜡的组织于包埋机内进行包埋。先将融化的蜡放入包埋框,待蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出按照包埋面的要求放入包埋框并贴上对应的标签。于-20°冻台冷却,蜡凝固后将蜡块从包埋框中取出并修整蜡块。4、切片:将修整好的蜡块置于石蜡切片机上切片,片厚4μm。 切片漂浮于摊片机40℃ 温水上将组织展平,用载玻片将组织捞起,并放进60℃ 烘箱内烤片。待水烤干蜡烤化后取出常温保存备用。 实验注意事项:1、固定剂应有足够的量,一般为组织块体积的10∽15倍。2、根据组织的不同和实验目的的不同,选取不同的固定剂。3、固定时间依材料大小、固定剂种类而异,可从1小时到几时小时,有时中间需要更新固定剂。某些固定剂对组织的硬化作用较强,作用时间应严加控制,不能过长。4、取材切面要平整,厚度不易超过2mm,否则脱水效果不能保证...
发布时间: 2018 - 12 - 11
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原代细胞培养是指细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。原代细胞培养四个阶段:1.获取样品 2.分离组织3.解剖或解离组织块4.接种于培养器皿中培养原代细胞培养种类:1. 将组织块贴附于适宜的基质中,细胞可自组织块向外迁移生长。2. 将组织块用机械法或酶消化法处理后获得细胞悬液,接种细胞悬液,其中部分细胞黏附于基质生长。酶的种类:胰蛋白酶          胶原酶          弹性蛋白酶          链酶蛋白酶          裂解酶          脱氧核糖核酸酶          透明质酸酶这些酶即可单独使用,又可联合应用。原代细胞培养共同需要的条件:在取材时需去除脂肪和坏死组织;为减少对组织的损伤,需用锋利的器具;适度离心以去除用于解离的酶;由于原代培养组织细胞的存活率很低,原代培养的细胞密度应高于正常传代培养的细胞密度;营养丰富的培养基如Ham’s F12比简单的培养基(Eagle’s MEM)更可取。如添加血清,胎牛血清比牛或马的血清更好,细胞成活率更高。特...
发布时间: 2018 - 12 - 07
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