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在还没有开始培养它们之前,你就需要做好这些准备。包括耗材的处理、试剂的配置,无菌检验等等。玻璃器皿的清洗,对于玻璃器皿(细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等)要用洗衣粉刷干净(注意死角),然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水冲洗数遍,除去残留酸液。瓶子之类,冲洗过程要使劲摇晃。试剂配置,细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节。无菌检验,主要采用过滤除菌:如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌:如 PBS、D-Hank's等。不同细胞对培养基的要求是不同的,要根据自己的细胞要求使用。至于实验操作,脑子里时刻提醒自己“无菌”;实验进行前,超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,避免细胞间交叉污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,再次以 70 % ethanol 擦拭无菌操作台面。实验用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般不要再边缘区域操作。你最好做到每天都去探望探望它们,看看他们的成长情况1、检查培养液颜色与透明度的变化,颜色变黄,说明PH值下降;变红或紫红色,说明PH值上升,细胞生长停滞、死亡,一般生长稳定的细胞2-3天换液一次,...
发布时间: 2019 - 08 - 06
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(1)复制方法  主要采用基因敲除和转基因技术进行模型的复制。(2)模型特点1)Tottere小鼠(tg/tg系)模型:tg/tg为研究最多的遗传性癫癎间模型之一,除共济失调外,主要表现为失神样发作及双侧同步性6-7Hz棘波与多棘慢波。发作出现于4周龄左右,其易感性被认为与脑内去甲肾上腺素能的过度支配有关。新近发现,该型小鼠存在编码α1亚单位钙通道的基因突变,并认为与其发作易感性有关。本模型可用于基因突变致癫癎机制的研究。2)基因敲除和转基因小鼠模型:第一个纯合子小鼠模型是进行肌阵挛癫癎(PME)综合征模型,即Cystatin B基因敲除小鼠模型。Cystatin B基因编码一种Cystatin蛋白激酶的抑制剂-Cystatin B,基因敲除则Cystatin B不能表达,而 U-L型PME患者均有此基因的突变及功能缺失。Cystatin敲除小鼠与U-L型PME患者的神经表型有特殊的重叠。中枢神经系统的离子通道病与人类癫癎有关,如Sharker型延迟整流钾通道基因敲除小鼠模型,出现严重的强直-阵挛发作,易导致早期死亡。转基因Q54小鼠模型,Q54小鼠的癫癎发作始于2月龄时,伴有行为受限及呆板重复动作,连续脑电图监测发现海马有局限性癫癎活动,甚至扩展至皮层也有癫癎活动,病理检查发现海马CA1~3区及门区有大量的细胞脱失及胶质增生。转基因(Q54小鼠提供了一个遗传学模型,在此...
发布时间: 2019 - 08 - 02
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(1)复制方法  实验装置是由双层有机玻璃圆筒制成的听源性发作仪,其外筒直径为50cm,高65cm,内筒可以自由移动,直径为35cm,高65cm。仪器上方装有110~120dB的高音电铃,供刺激用,下有一自由开关小门,供取放动物用。选用成年P77-PMC大鼠,雌雄均可。实验前12h禁食不禁水,将其放入听源性发作仪内,连续给予60s的铃声刺激,每天一次,连续3d。动物每天应在固定的时间以相同条件刺激,反应恒定者用于实验。(2)模型特点  听源性敏感动物在受到强铃声刺激时,产生的一种典型的运动性发作。其发作可分为四种类型:奔跑Ⅰ型(动物在60s的铃声刺激期间只奔跑1次,不发生惊厥);奔跑Ⅱ型(具有奔跑期和静止期,直到停止刺激为止,也不发生惊厥);惊厥Ⅰ型(动物只奔跑1次,随后出现阵挛性惊厥);惊厥Ⅱ型(奔跑2次,惊厥1次)。给药后,在一定时间内再测其反应强度。听源性发作的始发部位在脑干或中脑,但脑组织无任何器质性病变,而在不刺激情况下,其行为与听源性发作不敏感的正常鼠无任何区别。(3)比较医学  听源性发作与人类之光敏性和强直一阵挛发作近似,均具有遗传性,是研究抗癫癎药物和原发性癫癎发病原理常用的病理模型。   !
发布时间: 2019 - 08 - 01
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